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ELISA 樣品制備指南
更新時間:2020-08-12 點擊次數:1431

Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

在實驗中,樣品的制備也是非常重要的,操作不好可能會影響實驗結果,到底該怎么制備樣品呢?接下來小編就帶你看看ELISA樣品制備的方法吧!

1.細胞培養物上清液

①將培養基移至離心管, 4℃, 1,500 rpm 離心 10 分鐘;
②立即進行上清液的分裝(血清)并在 -80℃ 下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數。

2.細胞提取物

①將組織培養板放置在冰上;
②吸出培養基并用預冷PBS 輕輕洗滌細胞一次;
③吸出 PBS ,加入100 mm 培養板加入0.5ml*提取緩沖液;
④收集細胞至在傾斜板中,然后移至經過預冷的離心管中;
⑤短暫渦旋后在冰上孵育 15-30 分鐘;
⑥在 4℃ 下13,000 x rpm 離心 10 分鐘,沉淀不溶性內容物;
⑦將上清液(這里是指可溶性細胞提取物)分裝至預冷的離心管中,并于 -80℃ 保存,盡可能減少反復凍融次數。

3.條件培養基

①將細胞接種到*(含血清)生長培養基中,使細胞增殖達到一定的融合率;
②棄去培養基,數毫升預熱PBS 小心洗滌,重復洗滌步驟;
③棄去PBS 洗滌液并小心加入無血清培養基;
④孵育 1-2 天;
⑤將培養基移至離心管, 4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘;
⑥立即分裝上清液(血清)并在 -80℃ 下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數。

4.乳汁

①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘;
②分裝上清液并在 -80℃ 下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數。

5.血漿

①將全血收集到含抗凝劑的管中,例如 BD 抗凝真空采血管或添加 0.1M 檸檬酸鈉至 1/10 終體積;
②4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘;
③立即分裝上清液(血漿)并在 -80℃ 下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數。

6.尿液

①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘;
②等分上清液(血清)并在 -80℃ 下保存樣品,盡可能減少凍融循環次數。

7.唾液

①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘;
②立即分裝上清液(血漿)并在 -80℃ 下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數。

8.血清

①將全血收集到未經處理的測試管中,或者到不含抗凝劑的管中,如 BD 血清用真空采血管;
②在室溫下連續孵育 20 分鐘;
③4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘;
④立即分裝上清液(血漿)并在 -80℃ 下保存樣品,盡可能減少反復凍融次數。

9.組織提取物

①用干凈的工具解剖組織,best好在冰上、盡快進行,以防止被蛋白酶降解;
②將組織置于圓底的微量離心管中,并浸入液氮中進行“速凍”,將樣品保存在 -80℃ 下以便后續使用或放置在冰上進行直接勻漿;
③對于約 5 mg 的組織片,可向管中添加約 300 μl *提取緩沖液(查看細胞/組織提取緩沖液配方),然后用電動勻漿器勻漿;
④清洗刀片兩次,每次清洗使用 300μl *提取緩沖液,然后在 4℃ 下維持恒定攪拌 2 小時(例如置于冷室中的回旋振蕩器上);
⑤4℃ 13,000 x rpm 離心 20 分鐘。置于冰上,將上清液(這里是指可溶的蛋白質提取物)分裝至新、預冷的管中并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數。

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